致泻大肠埃希氏菌是谁？

大肠埃希氏菌（Escherichia coli）是由Escherich等人在1885年发现的，它也因此而得名。它在人和温血动物的肠道内普遍存在，是一种人畜共患的病原菌。

 

大多数大肠埃希氏菌无害，但有一部分能引起人类腹泻，这些大肠埃希氏菌被称为致泻大肠埃希氏菌。

致泻大肠埃希氏菌在哪？

致泻大肠埃希氏菌在自然界分布广泛，常见的污染食品为：肉和肉制品、奶和奶制品、蛋和蛋制品、蔬菜、水果和饮料等，工厂、学校的集体食堂是它最常见的“作案地点”，冷荤凉菜常常是它的“藏身之处”。

致泻大肠埃希氏菌的危害是什么？

任何人都可能因感染致泻大肠埃希氏菌而生病，但老人和儿童更易被它感染，且感染后往往症状较重。

致泻大肠埃希氏菌引起的感染症状各不相同，常见症状包括水样便、腹痛、恶心、发热、粪便中有少量粘液和血等，婴幼儿多表现为2周以上的持续性腹泻。

对于危害较大的肠出血性大肠埃希氏菌（例如大肠埃希氏菌O157:H7 ）,人感染大约4-9天后发病，常有突发性的腹部痉挛，有时类似于阑尾炎的疼痛，并由水样便转为血性腹泻，继而发展为溶血性尿毒综合征等并发症，病情严重者甚至会死亡。

致泻大肠埃希氏菌的检验

《GB 29921-2021预包装食品中致病菌限量》于2021年11月22日实施，其中，肉制品和即食果蔬制品中致病菌指标变化较大，检测指标由大肠埃希氏菌O157:H7/NM改为了致泻大肠埃希氏菌项目，引起了广大检验同仁的关注！

下面就跟随小编来一起了解一下这个标准吧！

（一）、检验流程

检样→样品处理→增菌培养→伊红美蓝(EMB)平板分离培养→生化鉴定

-→血清学鉴定→报告

1、增菌培养

  以无菌手续称取检样25 g，加在225 mL营养肉汤中，以均质器打碎1min或用乳钵加灭菌砂磨碎。

 将制备的样品匀液于36℃士1℃培养6h。取10μL，接种于30mL肠道菌增菌肉汤管内，于42℃士1℃培养18h。

2、分离培养

  将增菌液划线接种MAC和EMB琼脂平板,于36℃士1℃培养18h~24h，观察菌落特征。在MAC琼脂平板上，分解乳糖的典型菌落为砖红色至桃红色,不分解乳糖的菌落为无色或淡粉色;在EMB琼脂平板上，分解乳糖的典型菌落为中心紫黑色带或不带金属光泽，不分解乳糖的菌落为无色或淡粉色。

EMB培养基菌落特征:黑紫色或紫红色，圆形，边缘整齐，表面光滑，湿润，常具有金属光泽，也有的呈紫黑色，不带或略带金属光泽。

3、生化检验

选取平板上:可疑菌落10个20个(10个以下全选)，应挑取乳糖发酵,以及乳糖不发酵和迟缓发酵的菌落，分别接种TSI 斜面。同时将这些培养物分别接种蛋白胨水、尿素琼脂(pH7.2)和KCN肉汤。于36℃士1℃培养18h-24h。TSI斜面产酸或不产酸，底层产酸，靛基质阳性，H2S阴性和尿素酶阴性的培养物为大肠埃希氏菌。TSI斜面底层不产酸，或H2S、KCN、 尿素有任一项为阳性的培养物，均非大肠埃希氏菌。必要时做革兰氏染色和氧化酶试验。大肠埃希氏菌为革兰氏阴性杆菌，氧化酶阴性。

a、三糖铁琼脂试验:只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。而发酵乳糖的细菌，则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄色。细菌分解含硫氨基酸，产生H2S，与FeS04发生反应形成FeS。

大肠埃希氏菌，能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解乳糖，不产生H2S。

b、靛基质试验:细菌分解蛋白质中的色氨酸产生呵哚，吲哚与对二氨基苯甲醛作用，形成玫瑰吲哚而成红色。

c、脲酶试验:细菌分解尿素产生两分子氨，使培养基pH升高，指示剂酚红显示出红色，即证明细菌有脲酶。

4、PCR确认试验

使用1μL接种环刮取营养琼脂平板或斜面上培养18h~24h的菌落,悬浮在200uL0.85%灭菌生理盐水中，充分打散制成菌悬液，于13000r/min离心3min,弃掉上清液。加入lmL灭菌去离子水充分混匀菌体,于100℃水浴或者金属浴维持10min;冰浴冷却后，13000r/min离心3min,收集上清液;按1: 10的比例用灭菌去离子水稀释上清液,取2μL作为PCR检测的模板;所有处理后的DNA模板直接用于PCR反应或暂存于4℃并当天进行PCR反应;否则，应在-20℃以下保存备用(1周内)。

5、血清学试验

假定试验:挑取经生化试验证实为大肠埃希菌的琼脂培养物，用致病性大肠埃希氏菌、侵袭性大肠埃希氏菌和产肠毒素大肠埃希氏菌多价O血清和出血性大肠埃希氏菌0157血清做玻片凝集试验。

▲当与某一种多价O血清凝集时，再与该多价血清所包含的单价O血清做试验。

▲致泻大肠埃希氏菌所包括的O抗原群。如与某一单价O血清呈现强凝集反应，即为假定试验阳性。

6、结果报告

✧根据以上生化、PCR实验和血清学试验结果作出报告。